Inseminazione degli ovociti del partner con il seme del donatore

Gli ovociti, al recupero iniziale, sono dei complessi cumulo-ooforo-ovocita ovvero ovociti circondati da una rivestimento di cellule della granulosa. Per procedere alla tecnica di Fecondazione in Vitro, gli ovociti andranno decumulati, ovvero puliti dal rivestimento che li circonda per valutarne la maturità e quindi la possibile iniezione con lo spermatozoo selezionato. Subito dopo la decumulazione gli ovociti sono disposti in piastre di coltura preparate precedentemente con opportuni terreni di coltura. Le piastre, a loro volta, sono disposte all’interno di Incubatori che prevedono condizioni di temperatura e gas controllati.

Parallelamente, verrà preparato il Liquido seminale del donatore. Il campione crioconservato in un dispositivo definito paillette, dovrà essere scongelato a 37°C e successivamente trattato con opportuni mezzi di terreno per selezionale gli spermatozoi dotati di maggiore motilità e migliore morfologia.

Lo strumento utile per procedere alla ICSI (Iniezione Intracitoplasmatica dello Spermatozoo) è l’invertoscopio/micromanipolatore. Questo strumento, permette la manipolazione dei 2 gameti grazie ad aghi di dimensioni molto piccole (Holding - Injection) collegati a joystick guidati dall’embriologo.

I singoli ovociti vengono disposti in gocce di terreno di coltura tamponato (un terreno che garantisce il mantenimento del pH) in apposite piastre che permettono di eseguire la tecnica ICSI. Nella stessa piastra viene posizionata una goccia di PVP al 7% o al 10% (polivinilpirrolidone), un polimero idrosolubile, dove andranno inseriti gli spermatozoi. La funzione del PVP è di rallentare il movimento degli spermatozoi grazie alla sua consistenza molto viscosa. 

L’intera piastra, contenente entrambi i gameti, viene sommersa da un olio minerale per evitare l’evaporazione e la contaminazione delle gocce. 

Per procedere con la ICSI, l’ago Holding verrà utilizzato per aspirare e tenere bloccato l’ovocita , l’ago Injection servirà ad immobilizzare, aspirare e iniettare lo spermatozoo all’interno del citolplasma dell’ovocita.

Dopo la microiniezione gli ovociti verranno posti in mezzi di coltura opportuni per permettere lo sviluppo embrionale fino allo stato di Blastociti.