Inseminazione degli ovociti e del seme donati

Gli ovociti e il liquido seminale sono crioconservati in dispositivi definiti paillettes e stoccati in azoto liquido (-196°C). Il giorno stabilito per il trattamento, si procede allo scongelamento dei 2 gameti.

Liquido seminale del donatore: Il campione crioconservato in azoto liquido, dovrà essere scongelato a 37°C e successivamente trattato con opportuni mezzi di terreno per selezionale gli spermatozoi dotati di maggiore motilità e migliore morfologia.

Ovociti di donatrice: Lo scongelamento degli ovociti è forse lo step più delicato. La procedura prevede un passaggio molto rapido dall’azoto liquido (-196°C) a opportuni terreni di scongelamento con concentrazioni di crioprotettore sempre più basse. Al termine dello scongelamento, gli ovociti sono disposti in piastre di coltura, preparate precedentemente con terreni specifici, in attesa di procedere con l’inseminazione. Le piastre, a loro volta, sono disposte all’interno di Incubatori che prevedono condizioni di temperatura e gas controllati.

Lo strumento utile per procedere alla ICSI (Iniezione Intracitoplasmatica dello Spermatozoo) è l’invertoscopio/micromanipolatore. Questo strumento, permette la manipolazione dei 2 gameti grazie ad aghi di dimensioni molto piccole (Holding - Injection) collegati a joystick guidati dall’embriologo.

I singoli ovociti vengono disposti in gocce di terreno di coltura tamponato (un terreno che garantisce il mantenimento del pH) in apposite piastre che permettono di eseguire la tecnica ICSI. Nella stessa piastra viene posizionata una goccia di PVP al 7% o al 10% (polivinilpirrolidone), un polimero idrosolubile, dove andranno inseriti gli spermatozoi. La funzione del PVP è di rallentare il movimento degli spermatozoi grazie alla sua consistenza molto viscosa. 

L’intera piastra, contenente entrambi i gameti, viene sommersa da un olio minerale per evitare l’evaporazione e la contaminazione delle gocce. 

Per procedere con la ICSI, l’ago Holding verrà utilizzato per aspirare e tenere bloccato l’ovocita , l’ago Injection servirà ad immobilizzare, aspirare e iniettare lo spermatozoo all’interno del citolplasma dell’ovocita.

Dopo la microiniezione gli ovociti verranno posti in mezzi di coltura opportuni per permettere lo sviluppo embrionale fino allo stato di Blastociti.